PCR analiza: što je to? Kako ispravno preuzeti PCR test

Ne tako davno, pouzdan,vrlo osjetljiva i brza metoda dijagnosticiranja različitih infektivnih bolesti neke osobe. Ova metoda se zove "PCR analiza". Što je to, što će njezina bit, što mikroorganizmi mogu otkriti i kako ga ispravno predati, reći ćemo u našem članku.

Povijest otkrića

Izumio je metodu lančane reakcije polimeraze (PCR)Američki znanstvenik Cary Myullis 1983. godine. U početku je patentirana metoda dijagnoze tvrtke "Cetus Corporation", u kojoj je radio njegov kreator. Ali 1992. godine, sva prava i patenti prodani su tvrtki "Hoffman-La Roche". Nakon toga, činilo se da su paralelne slične studije provedene i snimljene od strane drugih američkih biologa, kao što su Alice Chen, David Edgar, John Treel. 1980. godine sovjetski znanstvenici A. Slyusarenko, A. Kaledin i S. Gorodetsky bavili su se tim problemom. Stoga je bilo nemoguće utvrditi jedinog nositelja prava. Mnogi izvrsni biokemičari pridonijeli su razvoju metode lančane reakcije polimeraze i patentirao njihove inovacije. U ovom trenutku, PCR analiza se provodi posvuda u posebno opremljenim laboratorijima.

Bit PCR dijagnostičke metode

PCR analiza: što je to i kako funkcionira? Bit metode je povećanje specifičnog mikrobnog medija pomoću posebnog enzima DNA polimeraze pod umjetnim uvjetima. Da biste to učinili, umnožite postojeći DNK-materijal. Dakle, u prisutnosti patogenog mikroorganizma u uzorku, njegova količina će se povećati biokemijskim laboratorijskim manipulacijama, a bakterija se ne može detektirati u mikroskopu.

Kako se provodi materijalno istraživanje?

Analiza zahtijeva:

• DNA predložak;
• primeri koji povezuju krajeve fragmenta materijala;
• termički stabilan enzim DNA polimeraze;
• kemijske tvari koje osiguravaju ispravno funkcioniranje enzima;
• pufersku otopinu potrebnu za stvaranje odgovarajućih uvjeta za rast i razvoj DNA materijala.
  

Za provedbu PCR provodi se 25-30 ponavljanja, koja se sastoji od tri faze: denaturacija, žarenja i produženja.

Za analizu lančane reakcije polimerazekoristite poseban uređaj - pojačalo. Moderna oprema vam omogućuje da postavite potrebni program za grijanje i hlađenje cijevi kako biste eliminirali pogreške tijekom dijagnoze.

Gdje se koristi dijagnoza?

Metoda lančane reakcije polimeraze koristi se u različitim područjima medicine:

• Forenzični znanstvenici ga koriste za identifikaciju genetskog materijala, kao što su kosa, slina ili krv;
• PCR analiza krvi pomaže kod genotipizacije, na primjer, da bi se otkrila pojedina genetski modificirana reakcija na određeni lijek;
• uz pomoć takvog postupka utvrdi postojanje obiteljskih veza među ljudima;
• najpopularnija PCR metoda postala je u medicinskoj dijagnostici za definiranje raznih zaraznih bolesti.

Koje infekcije otkrivaju PCR?

Dakle, lijekovi su dugo i uspješno koristili analizu PCR-a. Što je to, već smo naučili. A koji patogeni mogu biti otkriveni s njom? Sljedeće zarazne bolesti su dijagnosticirane PCR-om:

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidijaza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• bakterijska vaginoza;
• infektivna mononukleoza;
• trihomonijazu;
• infekcija papilomavirusom;
• tuberkuloze;
• herpes infekcija tipa 1 i 2;
• Helicobacter pylori infekcije;
• citomegalovirus;
• difterije;
• salmoneloze;
• HIV infekcija.
  

Također, PCR metode se koriste u dijagnozi raka.

Prednosti postupka

Dijagnoza PCR ima nekoliko prednosti:

1. Visoka osjetljivost. Čak i sa samo nekoliko DNA molekula mikroorganizma, PCR analiza određuje prisutnost infekcije. Metoda će pomoći u kroničnim i latentnim bolestima. Često u takvim slučajevima, mikroorganizam je neobrađen na druge načine.
2. Za studiju je prikladan bilo koji materijal, kao što su slina, krv, spol, kosa, epitelne stanice. Najčešći je krvni test i urogenitalni razmaz na PCR.
   

3. Ne zahtijeva dugoročno uzgoj usjeva. Automatizirani dijagnostički postupak omogućuje vam da dobijete rezultate studije nakon 4-5 sati.
4. Metoda je gotovo 100% pouzdana. Zabilježeni su samo pojedinačni slučajevi lažnog negativnog rezultata.
5. Sposobnost prepoznavanja nekoliko vrstapatogena iz jednog uzorka materijala. To ne samo da ubrzava proces dijagnosticiranja bolesti već i značajno smanjuje materijalne troškove. Često liječnik propisuje sveobuhvatnu PCR analizu. Cijena ispitivanja, koja se sastoji od definicije šest patogena, iznosi oko 1500 rubalja.

Preporuke za pripremu za analizu

Da bi rezultati bili pouzdani u PCR studiji, analiza bi se trebala provesti slijedeći preporuke za preliminarnu pripremu za dijagnozu:

1. Prije odustajanja od sline, trebali biste se suzdržati od uzimanja hrane i lijekova 4 sata prije uzimanja materijala. Neposredno prije postupka isperite usta kuhana voda.
2. Gore navedena pravila treba se pridržavati pri uzimanju uzorka s unutarnje površine obraz. Nakon ispiranja preporuča se lagana masaža kože kako bi se izolirala izlučivanje žlijezde.
3. Urin se obično bere kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljit WC genitalija. Potrebno je sakupiti 50-60 ml urina u sterilnom plastičnom spremniku. Da bi se osigurala čistoća materijala, preporuča se da žene ubace tampon u rodnicu, a muškarci maksimalno povlače kožu. Ne možete uzeti materijal tijekom menstrualnog protoka.
4. Za spermu morate se suzdržati od seksualnostiObaviti 3 dana prije naplate. Liječnici također savjetuju odbiti posjetiti saunu i uzeti vruću kupku, piti alkohol i začiniti hranu. 3 sata prije testa, morate se suzdržati od uriniranja.
5. Za isporuku urogenitalnog premaza, na primjer akoanaliza se provodi na klamidijskoj PCR, i žene i muškarci preporučuju se seksualni odmor za 3 dana. 2 tjedna prije testa, antibakterijski lijekovi se ne smiju uzimati. Za tjedan dana trebate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalne supozitorije, štrcaljke. 3 sata prije testa, morate se suzdržati od uriniranja. Tijekom menstruacije, zbirka materijala se ne provodi, samo 3 dana nakon prestanka krvnog ispuštanja može se uzimati urogenitalni razmaz.

PCR tijekom trudnoće

U razdoblju očekivanja bebe mnoge zarazneSeksualno prenosive bolesti su izuzetno opasne za normalan razvoj fetusa. STD-ovi mogu izazvati intrauterino usporavanje rasta, spontani pobačaj ili prerano rođenje, kongenitalne malformacije djeteta. Stoga je iznimno važno proći rani PCR test. Potrebno je dostaviti analizu prilikom registracije - do 12 tjedana.

Materijal ograde potječe od cervikalnog kanalauz pomoć posebne četke. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za dijete. Uobičajeno tijekom trudnoće, klamidija se analizira pomoću PCR metode, kao i ureaplazmoze, mikoplazmoze, citomegalovirusa, herpesa i papiloma virusa. Takav kompleks ispitivanja naziva se PCR-6.

PCR za dijagnozu HIV-a

U vezi s činjenicom da je postupak lančane reakcije polimerazereakcija je vrlo osjetljiva na promjene u tijelu i uvjeti dijagnoze, mnogi čimbenici mogu utjecati na rezultat. Stoga, PCR analiza HIV infekcije nije pouzdana metoda, njegova je učinkovitost 96-98%. U preostaloj 2-4% slučajeva, test daje lažne pozitivne rezultate.

Ali u nekim situacijama bez PCR dijagnostike HIV-ane upravljati. Obično se primjenjuje na osobe s lažno negativnim rezultatom ELISA. Takvi pokazatelji upućuju na to da osoba još nije razvila antitijela na virus i ne mogu se otkriti bez višestrukog povećanja broja. To se može postići provođenjem krvi pomoću PCR metode.

Također, ova dijagnoza je nužna za djecu prve godine života koji su rođeni od HIV pozitivne majke. Metoda je jedini način da pouzdano utvrdite status djeteta.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Metoda lančane reakcije polimeraze omogućujedetektirati DNA hepatitisa A, B, C dugo prije stvaranja protutijela na infekciju ili pojave simptoma bolesti. Posebno učinkovita je PCR na hepatitis C, budući da 85% takvih bolesti su asimptomatske i bez pravovremeno liječenje postaje kronična.

Pravovremeno otkrivanje patogena pomoći će u izbjegavanju komplikacija i produženog liječenja.

Iscrpno ispitivanje PCR-a

Složena PCR analiza: što je to? Ova lančana reakcija metoda ispitivanja polimezarnoy što uključuje utvrđivanje istovremeno nekoliko infekcija vrsta: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovirus, ureaplazma urealitikum, herpes prvi i drugi tip, gonoreja papiloma virus. Cijena ove dijagnoze kreće se od 2.000 do 3.500 rubalja. ovisno o klinici, materijala i opreme, kao i o vrsti analize: kvalitativno ili kvantitativno. Ono što je potrebno u vašem slučaju - liječnik odluči. U nekim slučajevima, jednostavno otkrivanje prisutnosti patogena u drugima, kao što je HIV, važnu ulogu kvantitativnim testom. naziva „PCR analiza 12” u dijagnostici svih gore patogena ispitivanja.

Objašnjenje rezultata analize

Dekodiranje PCR analize nije teško. Postoje samo dvije razine indikatora - "pozitivni rezultat" i "negativni rezultat". Ako se otkrije patogen, liječnici mogu potvrditi prisutnost bolesti s 99% pouzdanosti i nastaviti s liječenjem pacijenta. U kvantitativnoj metodi određivanja infekcije u odgovarajućem stupcu bit će naznačena numerička vrijednost otkrivenih bakterija. Samo liječnik može utvrditi stupanj bolesti i propisati potrebne tretmane.

U nekim slučajevima, primjerice, pri određivanjuHIV infekcije PCR metodom, s negativnim rezultatom, postaje potrebno provesti dodatne pretrage kako bi se potvrdili rezultati.

Gdje poduzeti analizu?

Gdje podnijeti PCR analizu: u državnoj poliklinici ili u privatnom laboratoriju? Nažalost, u općinskim medicinskim ustanovama, oprema i metode često su zastarjeli. Stoga je bolje davati prednost privatnim laboratorijima s modernom opremom i visoko kvalificiranim osobljem. Osim toga, u privatnoj klinici dobit ćete mnogo brže rezultate.

U Moskvi se nude mnogi privatni laboratorijiprovođenje PCR analize na različite infekcije. Na primjer, u klinikama kao što su Vita, kompleksna klinika, sretna obitelj i Uro-Pro, provodi se PCR analiza. Cijena ispitivanja iznosi 200 rubalja. za definiranje jednog patogena.

Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznihPCR je u većini slučajeva brz i pouzdan način otkrivanja patogena u tijelu u ranoj fazi infekcije. No, u određenim slučajevima valja odabrati druge metode dijagnoze. Potreba za provođenjem takve studije može odrediti samo stručnjak. Dekodiranje PCR analize također zahtijeva profesionalni pristup. Slijedite preporuke liječnika i ne dajte sebi testove koji nisu potrebni.